液相色谱(LC)使用操作方法及需要注意的几点

  高效液相色谱仪的操作步骤及需要注意的几点，包括开机前准备、系统平衡、进样分析、数据采集与分析、关机操作等方面内容。

  根据实验需求选择正真适合的流动相，如甲醇、乙腈、水、缓冲盐等。确保流动相纯度高，通常用色谱纯试剂。

  对流动相进行过滤，去除其中的颗粒杂质，防止堵塞色谱柱和仪器管路。常用的过滤膜孔径为0.45μm或0.22μm。

  对流动相进行脱气处理，以避免在检验测试过程中产生气泡影响基线稳定性和检测结果。脱气方法有超声脱气、在线. 仪器检查

  检查仪器各部件的连接是不是正确、牢固，包括输液泵、进样器、色谱柱、检测器等。

  设置合适的流速，一般根据色谱柱的规格和实验要求设定。例如，对于常规分析柱，流速可设置为1.0  1.5 mL/min。

  打开输液泵的排液阀，排出管路中的空气，直到流出的液体无气泡为止，然后关闭排液阀。

  让流动相在色谱系统中循环一段时间，使系统达到稳定的压力和流速，通常要平衡30分钟至1小时，具体时间依据仪器和色谱柱的情况而定。在此过程中，观察基线. 检测器预热

  如果使用紫外检测器，打开检测器电源，设置检测波长。根据样品的吸收特性选择正真适合的波长，例如，检测含有苯环结构的化合物时，常用波长为254nm或280nm。

  1. 样品准备将样品溶解在合适的溶剂中，确保样品完全溶解且溶液澄清。如果样品溶液有沉淀或浑浊，有必要进行过滤处理。样品溶液的浓度应根据检测器的灵敏度和色谱柱的容量进行适当调整，一般使检测信号在检测器的线. 进样操作

  使用微量注射器吸取适量的样品溶液，一般进样量为1  10μL，根据真实的情况选择。

  将微量注射器插入进样阀的进样口，按照进样阀的操作说明，将样品注入色谱系统。进样时要迅速、准确，避免样品扩散和引入气泡。

  当样品进入色谱柱后，检测器会对流出的组分进行仔细的检测，并将检测信号传输到数据处理系统。

  在仪器操作软件中设置数据采集参数，如采集时间、采样频率等。采集时间应根据样品的分离情况做调整，确保目标组分能够完全流出色谱柱。

  开始采集数据，观察色谱图的基线和峰形变化。一般的情况下，基线应平稳，峰形应对称、尖锐。

  采集完数据后，使用仪器自带的数据分析软件或其他专业色谱数据分析软件对数据来进行处理。

  进行峰识别，确定各个峰对应的组分。可以通过与标准物质的保留时间对比或利用软件的峰识别功能来实现。

  测量峰面积或峰高，用于定量分析。根据峰面积或峰高与样品浓度的线性关系，计算样品中各组分的含量。

  可以进行积分处理，优化峰的积分参数，使积分结果更准确地反映峰的实际面积。

  分析结束后，用与流动相互溶且能溶解残留样品的溶剂冲洗色谱系统。例如，如果流动相是甲醇  水体系，可以先用甲醇冲洗色谱柱和管路，以去除残留的样品。

  设置流速为1.0  1.5 mL/min，冲洗30分钟至1小时，具体时间依据色谱柱的污染情况而定。冲洗过程中，观察基线变化，确保基线. 关闭输液泵

  流动相的选择要根据样品的性质和分离要求来确定。避开使用对色谱柱有损害的溶剂，如含有强腐蚀性物质或与固定相发生化学反应的溶剂。

  不同品牌和批次的流动相溶剂有几率存在差异，尽量保持流动相的一致性，以确保实验结果的重现性。

  严格根据相关要求对流动相进行过滤，防止颗粒杂质进入色谱系统。定期更换过滤膜，以保证过滤效果。

  脱气不彻底会导致基线波动、鬼峰等问题，影响检测结果。超声脱气时间不宜过长，以免溶剂挥发影响流动相组成。若使用在线脱气机，要确保其正常工作。

  使用含有缓冲盐的流动相后，要及时用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，防止缓冲盐在柱内结晶，损坏色谱柱。一般冲洗时间为30分钟左右，冲洗流速可适当提高。

  安装色谱柱时，要注意色谱柱的方向，确保流动相的流向正确，一般按照色谱柱上标记的箭头方向连接。

  拆卸色谱柱时，要先关闭输液泵，待压力降为零后再做相关操作，避免压力冲击损坏色谱柱。

  避免使用过高的流速，以免对色谱柱造成压力冲击和磨损。一般流速别超过色谱柱规定的最大流速。

  防止样品中含有不溶性杂质、强酸性或强碱性物质进入色谱柱，对柱填料造成损害。对样品进行预处理，如过滤、离心等。

  色谱柱在使用一段时间后有极大几率会出现柱效下降的情况，能够最终靠适当的冲洗和再生办法来进行恢复。但如果柱效严重下降，在大多数情况下要更换色谱柱。

  长期保存时，根据色谱柱的类型选择保存溶剂。例如，反相色谱柱一般保存在纯甲醇或乙腈中，正相色谱柱保存在正己烷等合适的溶剂中。保存温度一般为室温，避免低温导致溶剂结冰损坏色谱柱。

  进样阀要定时进行清洗，以去除内部残留的样品。清洗方法可根据进样阀的类型选择合适的溶剂进行冲洗。

  根据样品的吸收特性准确选择检测波长。如果对样品的吸收光谱不了解，可以进行全波长扫描，以确定最佳检测波长。

  避免在检测波长附近有较强的背景吸收，以免影响检测灵敏度和基线. 基线稳定性

  定期检查检测器的光源、流通池等部件是否正常。光源老化可能导致检测信号减弱和基线漂移，需要及时更换光源。

  保持检测器流通池的清洁，避免有杂质或气泡进入影响检测。如果流通池被污染，可以按照仪器说明书的方法进行清理洗涤。

  液相色谱仪应放置在温度和湿度相对稳定的环境中，一般温度控制在20  25℃，湿度控制在40%  60%。温度和湿度的剧烈变化可能影响仪器的性能和检测结果的准确性。

  仪器使用的有机溶剂大多易燃、易爆，要远离火源和热源。在进行溶剂配制和更换时，要在通风良好的环境中进行。

  定期对仪器进行维护和保养，检查仪器的电气系统、机械部件等是不是正常，确保仪器的安全运行。

  在实验过程中，要及时、准确地记录实验条件、进样量、检验测试的数据等信息。记录的数据要清晰、完整，便于后续的数据处理和结果分析。

  对实验数据要进行妥善保存，可采用电子存储和纸质记录相结合的方式，保存期限根据实验要求和相关规定执行。

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